一、人活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)ELISA試劑盒詳細介紹
中文名稱:人活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)ELISA試劑盒
規(guī)格: 48T /96T
品牌:臻科生物
種屬:人ELISA試劑盒
檢測波長:450 nm
所需樣本體積: 50ul
適用范圍:僅供科研，不得用于臨床診斷。
保存及有效期:2-8℃，六個月
檢測樣本種類:用于測定血清，血漿及相關液體等樣本的含量或者表達。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本。
臻科生物供應的種屬有：人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、人、豬牛羊、雞鴨鵝、植物ELISA試劑盒等
二、實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)水平。用純化的人活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)，再與HRP 標記的活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)濃度。
三、試劑盒組成
1 | 30 倍濃縮洗滌液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1 瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1 瓶 | 8 | 標準品（240 pmol/L） | 0.5ml×1 瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12 孔×8 條 | 9 | 標準品稀釋液 | 1.5ml×1 瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說明書 | 1 份 |
5 | 顯色劑A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 張 |
6 | 顯色劑 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 個 |
四、操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
五、試劑盒計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，
即為樣品的實際濃度。
六、注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值
大于標準品孔di一孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計
算時請后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
七．特別提醒
1.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
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